• Global

    基因操作工具制備

    基因操作工具制備

    您對慢病毒有什么問題嗎?

    +

    400-621-0302

    service@genechem.com.cn

    在線客服

    淘基因

    400-621-0302

    service@genechem.com.cn

    在線客服

    淘基因

     

    慢病毒

    慢病毒(Lentivirus)是逆轉錄病毒的一種,基因組為單鏈RNA。但區別于一般的逆轉錄病毒,慢病毒具有更廣的宿主范圍,對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。重組慢病毒載體是以HIV-1(人類免疫缺陷I 型病毒)為基礎,使用皰疹病毒VSVG 外殼蛋白發展起來的工具載體,其毒性基因已經被剔除并被外源性目的基因所取代,屬于假型病毒。慢病毒可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達。


    慢病毒可有效地感染神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞,為神經領域、心血管領域、肝臟、肌肉、、、腫瘤及其他領域的科研工作者們提供更強有力的基因研究工具。

    優勢

    慢病毒與其他病毒工具比較,具有以下優勢:

    a. 表達時間長:慢病毒通過將外源基因整合到宿主細胞基因組上,可實現目的基因長時間穩定的表達,不隨著細胞分裂傳代而丟失,是細胞實驗的首選;
    b. 安全性高:未發現致病性,已被用于CAR-T 治療作用于人體;
    c. 免疫原性低: 直接注射活體組織不易造成免疫反應,適用于動物實驗。

    病毒表達系統 腺病毒
    (Adenovirus)
    慢病毒
    (Lentivirus)
    腺相關病毒
    (Adeno-As sociate virus)
    病毒基因組 雙鏈DNA病毒 RNA病毒 單鏈DNA病毒
    復制 條件復制 不可復制 條件復制
    滴度 最高可達1012pfu/ml 最高可達109TU/ml 最高可達1012-13v.g/ml
    感染細胞類型 感染分裂和不分裂細胞 感染分裂和不分裂細胞 感染分裂不旺盛的細胞
    表達豐度 高水平表達 中到高水平表達 高水平表達
    表達時間 快(1-2天) 慢(2-4天) 1-2周
    持續表達時間 病毒基因組游離于宿主基因組外,
    瞬時表達外源基因
    病毒基因組整合于宿主基因組,
    長時間、穩定表達外源基因
    病毒基因組游離于宿主基因組外,
    在分裂旺盛的細胞中可長時間表達
    克隆容量 適合表達小于5kb的外源片段 適合表達小于4kb的外源片段 適合表達小于2.8kb的外源片段
    免疫原性 較高免疫原性 低免疫原性 低免疫原性
    安全性 可能會引起一些咳嗽流涕 暫無發現致病性,
    已被用于CAR-T治療作用于人體
    暫無發現致病性,
    已通過歐盟和FDA許可,
    用作基因治療藥物的載體

    包裝服務


    純化工藝

    吉凱獨有的病毒分級純化工藝,滿足您從永生化細胞到原代和干細胞,從動物體內水平到cGMP細胞治療等不同實驗需求:


    A級慢病毒純化工藝:

    通過超速離心初步濃縮慢病毒顆粒,同時去除病毒上清中的血清蛋白和宿主蛋白,大部分質粒DNA和宿主DNA,然后應用超濾,
    進一步濃縮,去除質粒DNA和宿主DNA,獲得高純度慢病毒產品。







    B級慢病毒純化工藝:

    通過切向流過濾系統,在濃縮慢病毒的同時,極大程度地去除DNA殘留和蛋白殘留,同時通過超濾進一步濃縮和純化,獲得超純
    慢病毒產品。



    C級慢病毒純化工藝:

    通過陰陽離子交換層析,特異性吸附慢病毒顆粒,然后運用鹽離子洗脫,獲得可用于臨床試驗的慢病毒產品。



    質量檢測

    慢病毒質量檢測標準:

    FDA和《中國藥典》中針對病毒疫苗等制劑提出了病毒滴度(≥2E+8TU/ml),質粒殘留(≤4E+8-copy/ml),宿主DNA
    殘留(≤10ng/ml),BSA殘留(≤50ng/ml)等產品質量和安全性的純度要求,同時針對污染和載體安全性,提出了支原體,
    細菌等微生物安全和RCL的要求。吉凱基因根據中國藥典法質量標準,將病毒樣品送至專業檢測機構,嚴格測定每一生產批次慢
    病毒的各項指標。

    檢測項目 檢測方法 檢測結果 單位 參考檢測范圍
    支原體 Nest PCR 陰性 .. 陰性
    內毒素 LAL 合格 EU/mI ≤50
    衣原體 培養法 陰性 .. 陰性
    細菌 培養法 陰性 .. 陰性
    真菌 培養法 陰性 .. 陰性
    活性滴度 絕對定量 1.00E+08 TU/mI ≥1E+8TU

    吉凱病毒質量檢測標準




    慢病毒鑒定方法:

    吉凱基因使用精準的絕對定量qPCR法與GFP熒光計數法檢測活性病毒的感染滴度。這兩種檢測方法直接測定的是插入到細胞基
    因組的病毒基因組拷貝數,最接近真實滴度。而絕對定量qPCR法更是醫療級病毒產品公認的滴度檢測方法,測定滴度更準確,
    杜絕虛假。

    檢測項目 原理 優點 缺點
    GEP熒光計數法 FACS(流式細胞計數) 經典方法,重復性好
    檢測活性病毒的感染滴度
    對儀器和操作要求高
    操作復雜
    絕對定量qPCR法
    (DNA定量法)
    病毒感染工具細胞后,抽提整合目的片段的細胞基因組DNA,與標準品比較 檢測活性病毒的感染滴度
    最接近真實滴度
    對儀器和操作要求高
    操作復雜
    RT-qPCR法
    ( RNA基因組法)
    病毒梯度稀釋感染工具細胞后,抽提RNA,RT-qPCR檢測病毒基因組表達 檢測活性病毒的感染滴度 受限于病毒感染后檢測
    基因的表達豐度
    p24核心蛋白
    ELISA定量法
    利用慢病毒顆粒穩定表達的p24蛋白進行ELISA檢測 簡單,快捷,重復性好 反映的是病毒物理顆粒數不是活性滴度

    市場常見滴度檢測方法比較




    想要了解吉凱基因慢病毒包裝完整流程,請點擊這里下載慢病毒構建包裝報告>>

    載體選擇

    吉凱提供完善的慢病毒產品體系,用于操作編碼基因和非編碼基因,如lncRNA、microRNA、circRNA。以下慢病毒載體可供您選擇,點擊查看載體圖譜>>
    調控方式 載體編號 元件順序 原核抗性 真核抗性 熒光標記
    啟動子
    熒光標記 RNAi/過表達
    啟動子
    過表達 GV365 Ubi-MCS-3FLAG
    -CMV-EGFP
    Ampicillin CMV GFP Ubiquitin
    GV320 Ubi-MCS-3FLAG
    -SV40-Cherry
    Ampicillin SV40 Cherry Ubiquitin
    GV341 Ubi-MCS-3FLAG
    -SV40-puromycin
    Ampicillin Puromycin Ubiquitin
    GV358 Ubi-MCS-
    3FLAG
    -CMV-EGFP
    Ampicillin Puromycin SV40 GFP Ubiquitin
    GV492 Ubi-MCS-3FLAG-
    CBh-gcGFP-IRES
    -puromycin
    Ampicillin Puromycin CBh GFP Ubiquitin
    過表達
    Tet-on
    GV308 TetllP-MCS-3FLAG
    -Ubi-TetR-IRES
    -Puromycin
    Ampicillin Puromycin TtlIP
    干擾 GV112 hU6-MCS
    -CMV-
    Puromycin
    Ampicillin Puromycin U6
    GV115 hU6-MCS-CMV-
    EGFP
    Ampicillin CMV GFP U6
    GV248 hU6-MCS-Ubiquitin
    -EGFP-IRES-
    puromycin
    Ampicillin Puromycin Ubiquitin GFP U6
    GV298 U6-MCS-Ubiquitin
    -Cherry-IRES-
    puromycin
    Ampicillin Puromycin Ubiquitin Cherry U6
    GV493 hU6-MCS-CBh-
    gcGFP-IRES-
    puromycin
    Ampicillin Puromycin CBh GFP U6
    干擾Tet-on GV307 TetlIP-TurboRFP
    -MCS(MIR30)-Ubi-
    TetR-IRES
    -Puromycin
    Ampicillin Puromycin TetlIP RFP TetlIP
    miRNA-up GV369 Ubi-MCS-SV40
    -EGFP-IRES
    -puromycin
    Ampicillin Puromycin SV40 GFP Ubiquitin
    GV209 H1-MCS-CMV
    -EGFP
    Ampicillin CMV GFP H1
    GV309 hU6-MCS-Ubiquitin
    -EGFP-IRES
    -puromycin
    Ampicillin Puromycin Ubiquitin GFP U6
    miRNA-down GV280 hU6-MCS-Ubiquitin
    -EGFP-IRES
    -puromycin
    Ampicillin Puromycin Ubiquitin GFP U6
    GV234 hU6-MCS-CMV
    -EGFP
    Ampicillin CMV GFP U6

    應用案例

    1. 細胞感染

    慢病毒可有效感染神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞,對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。

    了解慢病毒細胞感染操作及更多細胞推薦MOI 請點擊這里>>




    2. 在體注射

    2.1 神經系統

    代表文獻 吉凱客戶文章Nature medicine,2010.16(12):1439-1443.

    文獻來源:Treatment of cerebral ischemia by disrupting ischemia-induced interaction of nNOS with PSD-95.




    2.2  心血管系統

    代表文獻 Circulation,2016:CIRCULATIONAHA,116.017949.

    文獻來源:Inhibition of aberrant microRNA-133a expression in endothelial cells by statin prevents endothelial dysfunction by targeting GTP cyclohydrolase 1 in vivo.




    2.3  肝臟

    代表文獻 吉凱客戶文章 Joumal fo virology, 2016, 90(4): 1729-1740.

    文獻來源:Hepatitis B virus X protein induces hepatic steatosis by enhancing the expression of liver fatty acid binding protein.




    2.4  肺

    代表文獻 Cell death & disease, 2017, 8(1): e2566.

    文獻來源:MicroRNA-101 inhibits invasion and angiogenesis through targeting ITGA3 and its systemic delivery inhibits lung metastasis in nasopharyngeal carcinoma.




    更多部位體內注射參數,點擊查看與下載>>

    更多體內注射實驗操作視頻,點擊查看與下載>>


    引用文獻

    1. The metabolic ER stress sensor IRE1α suppresses alternative activation of macrophages and impairs energy expenditure in obesity. 2017, NATURE IMMUNOLOGY (IF=21.506). 吉凱產品:過表達慢病毒 研究領域:能量代謝  中國科學院上海生命科學研究院營養科學研究所

    2. Cardiac Fibroblast-Specific Activating Transcription Factor 3 Protects Against Heart Failure by Suppressing MAP2K3-p38 Signaling. 2017, Circulation (IF=19.309). 吉凱產品:RNAi慢病毒 研究領域:心臟衰竭  首都醫科大學附屬北京安貞醫院

    3. MicroRNA 301A Promotes Intestinal Inflammation and Colitis-Associated Cancer Development by Inhibiting BTG1. 2017, Gastroenterology (IF=18.392). 吉凱產品microRNA慢病毒 研究領域小腸和結腸炎癥  上海市第十人民醫院

    4. A Critical Role of Presynaptic Cadherin/Catenin/p140Cap Complexes in Stabilizing Spines and Functional Synapses in the Neocortex. 2017, Neuron (IF=14.024). 吉凱產品RNAi慢病毒 研究領域神經  中國科學院神經科學研究所

    5. EphrinB2 Regulates Cardiac Fibrosis Through Modulating the Interaction of Stat3 and TGF-β/Smad3 Signaling. 2017, Circulation Research (IF=13.965). 吉凱產品:RNAi慢病毒和過表達慢病毒  研究領域:心臟纖維化  浙江大學醫學院附屬第二醫院

    6. Aldehyde dehydrogenase-2 (ALDH2) opposes hepatocellular carcinoma progression by regulating AMP-activated protein kinase signaling in mice. 2017, Hepatology (IF=13.246). 吉凱產品:過表達慢病毒  研究領域:肝癌  第二軍醫大學
    7. PD‐1 Checkpoint Blockade in Combination with an mTOR Inhibitor Restrains Hepatocellular Carcinoma Growth Induced by Hepatoma Cell‐Intrinsic PD‐1. 2017, Hepatology (IF=13.246). 吉凱產品:過表達慢病毒  研究領域:肝癌  復旦大學附屬中山醫院
    8. Distinct role of nuclear receptor corepressor 1 regulated de novo fatty acids synthesis in liver regeneration and hepatocarcinogenesis in mice. 2017, Hepatology (IF=13.246). 吉凱產品:RNAi慢病毒  研究領域:肝再生和肝癌  第二軍醫大學
    9. SIRT1/HSF1/HSPs Pathway is Essential for Exenatide-alleviated Lipid-induced Hepatic Endoplasmic Reticulum Stress. 2017, Hepatology (IF=13.246). 吉凱產品:RNAi慢病毒  研究領域:肝臟內質網應激  中山大學附屬第三醫院

    產品查詢

    聯系我們 客戶支持 吉凱商城
    91麻豆精品福利在线观看,91麻豆精品国产,91麻豆精品国产片在线观看,91麻豆精品国产自产,91麻豆精品国产自产在线