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    基因操作工具制備

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    cre/loxp

    Cre-loxP 系統是一種重組酶系統,源于P1噬菌體的一個DNA重組體系,該系統由組織特異性重組酶Cre和loxP位點組成,其中Cre重組酶是一種位點特異性的DNA重組酶,能特異性識別loxp位點并介導loxp位點間的序列刪除或重組;loxP位點是一段長度為34bp的DNA序列,包括兩個13bp的反向重復序列和一個不對稱的8bp間隔區,其中反向重復序列是Cre重組酶的特異識別位點,而8bp的間隔區域決定了loxP位點的方向。


    Cre-loxP 系統是一種被用作控制基因組DNA中位點特異性重組事件的遺傳工具,被廣泛應用于特異位點的基因敲除、基因插入、基因翻轉和基因易位,可達到在基因水平上對生物體進行定向遺傳改造的目的。該系統在真核生物和原核生物中均有廣泛應用。

    作用原理

    一對loxp序列排列差異將導致不同結果,如基因敲除、基因倒位、基因易位等。

    a. 敲除:若兩個loxP位點位于同一條DNA鏈上,且方向相同,Cre重組酶可敲除loxP間的序列;

    b. 倒位:若兩個loxP位點位于同一條DNA鏈上,且方向相反,Cre重組酶誘導loxP間的序列倒位;

    Cre-loxP誘導基因重組的方式


    應用形式

    當前,Cre/loxP系統主要有以轉基因動物為載體和以病毒為載體兩種形式。

    a. 基于轉基因動物的Cre/loxP基因操作?;蚯贸和ㄟ^cre小鼠(一般使用組織特異性啟動子表達cre重組酶)和含有loxp位點的floxed小鼠雜交,獲得在特定組織或細胞中敲除靶基因的條件性敲除小鼠?;蚣せ睿涸趦蓚€同向的loxp位點之間加入終止信號,loxp位點后加入靶基因,floxed小鼠與cre鼠雜交后,cre重組酶將會切除終止信號和1個loxp位點,其loxp位點后面的靶基因就會被激活表達。然而基于轉基因動物的Cre/loxP基因操作有一定局限性,如Cre和loxP轉基因動物種類有限、制備耗時、成本高等?;诖?,越來越多的科研工作者們選擇使用病毒工具引入Cre或loxP元件。


    b. 基于病毒在體注射的Cre/loxP基因敲除:使用病毒工具引入Cre或loxP元件,如將含有組織特異性啟動子的Cre病毒注射到loxP轉基因小鼠體內實現特定部位的靶基因敲除,這種方法可大大地縮短實驗周期,使用特異性啟動子驅動的cre重組酶表達結合定點注射的方法可實現更強的區域和組織特異性。


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    Cre病毒現貨列表

    Cre 重組酶病毒系列適用于CKO/Loxp小鼠體內,能夠實現細胞/組織特異性表達。吉凱基因提供重組酶現貨產品,價格低至1400元起,最快5個工作日發貨,點擊這里查詢與購買>>

    類別 貨號 載體名稱 啟動子 啟動子表達位置 主要元件 熒光 表達方式
    AAV AAV00040 pAAV-CAG-EGFP-T2A-Cre Cag 廣譜 Cre EGFP 正常表達
    AAV00043 pAAV-CAMKlla-GFP-2A-Cre CaMklla 谷氨酸能神經元 Cre GFP 正常表達
    AAV00055 pAAV-CMV bGlobin-Cre-eGFP CMV-bGlobin 廣譜 Cre EGFP 正常表達
    AAV00056 pAAV-hSyn-Cre-EGFP hSyn 神經元 Cre EGFP 正常表達
    AAV00103 pAAV-pmSyn1-EBFP-Cre pmSyn1 神經元 Cre EGFP 正常表達
    AAV00048 pAAV-Syn-Cre Syn 神經元 Cre 正常表達
    慢病毒 CRE-慢病毒 EF1a-3FLAG-MCS-IRES-puromycin EF1a 廣譜 Cre 正常表達
    CRE-慢病毒 EF1a-3FLAG-MCS-IRES-EGFP EF1a 廣譜 Cre EGFP 正常表達
    腺病毒 CRE-腺病毒 CMV-MCS-3FLAG CMV 廣譜 Cre 正常表達
    CRE-腺病毒 CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP CMV 廣譜 Cre EGFP 正常表達
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