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    Western Blot

    利用抗原抗體反應,檢測樣本中目的蛋白表達量;檢測基因蛋白表達量最常用的方法,半定量,無法提供基因的細胞定位等信息。

    技術原理

    Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質,“探針”是抗體,“顯色”用標記的二抗。經過PAGE分離的蛋白質樣品,轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質,且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原,與對應的抗體起免疫反應,再與酶或同位素標記的第二抗體起反應,經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的各蛋白成分。

    結果展示


    用目的基因shRNA慢病毒感染A549細胞,3天后收集細胞,提取細胞總蛋白,用western blot進行檢測,相比對照組,shRNA慢病毒感染后的實驗組增殖凋亡相關蛋白表達量改變情況。

    參考文獻

    Burnette WN. (1981). "'Western blotting': electrophoretic transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate—polyacrylamide gels to unmodified nitrocellulose and radiographic detection with antibody and radioiodinated protein A". Analytical Biochemistry. 112 (2): 195–203.
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