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    靶標驗證

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    流式檢測

    熒光標記抗體孵育細胞后,利用流式細胞檢測儀比較不同條件處理的實驗組之間細胞表面蛋白的表達差異,是檢測膜蛋白表達的首選,吉凱提供多達4色標記檢測。

    技術原理

    細胞表面分子抗原的流式熒光檢測是最常用的流式細胞分析方法之一,使用目的蛋白的熒光抗體標記目的細胞,通過流式細胞儀來檢測有熒光信號的細胞,從而分析和判斷待測細胞群體中目的蛋白表達陽性率。比較不同條件處理的實驗組之間,細胞表面蛋白的表達差異。

    常見問題

    Q:流式細胞檢測與western的區別?


    A: (1Western可以檢測多種類型蛋白,但流式主要適合檢測膜蛋白,且抗體通常是直接和熒光基團相連;

    (2)Western測蛋白含量對抗體的量需要很少,一般1:1000左右,而流式對抗體的需要量很大,一般1:50 ;

    (3)流式細胞檢測可以知道表達目的抗原的細胞占比情況,Western Blot只能比較樣本間目的抗原平均表達情況。

    結果展示

    目的細胞按實驗設計組別進行藥物處理后,收集細胞懸液,離心,用緩沖液洗滌,加細胞染色緩沖液重懸后,用PE標記的CD11b抗體進行染色,染色結束后,用細胞染色緩沖液洗滌、重懸,進行流式儀檢測 (Millipore,Guava easyCyte HT),分析各實驗組別中CD11b 陽性細胞百分比差異。

    參考文獻

    Fukusumi T, et al. CD10 as a novel marker of therapeutic resistance and cancer stem cells in head and neck squamous cell carcinoma. Br J Cancer. 2014 Jul 29;111(3):506-14.
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