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    靶標驗證

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    Brdu/EdU

    可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期),活體注射或細胞培養加入,而后利用抗BrdU單克隆抗體,ICC染色,顯示增殖細胞。同時結合其它細胞標記物,雙重染色,可判斷增殖細胞的種類,增殖速度,對研究細胞動力學有重要意義。

    技術原理

    溴脫氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine, BrdU)是DNA前體胸腺嘧啶核苷類似物,可競爭性摻入S期細胞單鏈DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶,利用抗體連接酶或熒光素作為指示系統標記BrdU,當處于旺盛分裂的細胞摻入BrdU后,即可檢測出含有BrdU的細胞,并以此判斷細胞的數目。固相包被細胞的微孔中加入BrdU抗體,經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的BrdU呈正相關。用酶標儀在450 nm波長下測定吸光度(OD值),通過OD值的高低,反映正在合成DNA細胞數的多少,從而反映正處于增殖狀態的細胞量。

    結果展示

    用待研基因shRNA慢病毒感染T24細胞,3天后收集細胞接種96孔板,待細胞貼壁后第一天和第四天進行Brdu檢測,結果顯示,shRNA下調目的基因表達后,細胞增殖顯著減緩,表明待研基因與T24細胞增殖顯著相關。

    參考文獻

    P. Thored, A. Arvidsson, E. Cacci, H,et al,. Persistent production of neurons from adult brain stem cells during recovery after stroke. Stem Cells.2006, 24: 739-747.
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