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    MTT/MTS/CCK8

    反映細胞增殖情況;通常連續檢測5天,獲得細胞增殖曲線;檢測細胞增殖最經濟常用的方法,MTT只適用于貼壁細胞,MTS/CCK8可用于懸浮細胞。

    技術原理

    活細胞特別是增殖期細胞的線粒體中的琥珀脫氫酶能使外源性MTT(即黃色噻唑蘭)還原成難溶于水的藍紫色針狀Formazan結晶并沉淀在細胞中,且Formazan的形成量與細胞活力成正比,二甲基亞砜(DMSO)能夠溶解Formazan結晶,用酶標儀在特定波長處測定其吸收值,即可間接反映細胞增殖情況。MTS及WST–8(CCK-8試劑)都是新型唑類化合物,和MTT一樣,同樣都能被細胞線粒體中的脫氫酶還原,MTS及WST–8被還原后的Formazan化合物具有高度水溶性,無需再用加DMSO,可直接用酶標儀在特定波長處測定吸收值。

    因還原生成的甲臜物數量與活細胞的數量成正比,MTT、MTS、CCK-8均可用于細胞增殖的檢測,目前被廣泛應用于抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。

    結果展示

    為研究某基因是否是某腫瘤細胞增殖相關的關鍵基因,可將目的基因shRNA慢病毒感染靶細胞,使靶細胞內源表達的目的基因表達下調,隨后用MTT進行檢測,觀察目的基因表達下調后的細胞與對照細胞相比細胞增殖的變化,從而推斷結論。


    MTT 實驗結果圖


    用待研基因shRNA慢病毒感染A375細胞,3天后收集細胞,按2000/孔的細胞數量接種細胞至96孔板,第二天待細胞貼壁后,開始進行MTT檢測,連續檢測5天,獲得細胞增殖曲線。結果顯示,shRNA下調目的基因表達后,細胞增殖顯著減緩,表明待研基因與A375細胞增殖顯著相關。

    參考文獻

    Suventha Moodley,Neil A. Koorbanally,Thrineshen Moodley.The 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay is a rapid, cheap, screening test for the in vitro anti-tuberculous activity of chalcones. Journal of Microbiological Methods. 2014,104:72–78.
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