• Global

    靶標驗證

    靶標驗證

    您對HCS高內涵細胞篩選有什么問題嗎?

    +

    400-621-0302

    service@genechem.com.cn

    在線客服

    淘基因

    400-621-0302

    service@genechem.com.cn

    在線客服

    淘基因

     

    HCS高內涵細胞篩選

    針對基因的功能研究,通常會遇到兩種情況的問題:

    一種情況是一個基因一個基因的進行,效率低,往往要做好幾個基因才能找到功能明顯和確定的基因。

    另一種情況是做完高通量組學比如表達譜芯片、RNA-seq、全基因組測序、全外顯子測序、蛋白質組學等,有成百上千個候選基因、蛋白、突變位點等,不知道該挑選什么基因進行下面的研究。

    HCS就是為了解決基因功能研究中這兩種最常見的困難而誕生的。

    HCS(High content Screening)高內涵篩選,指一次性對至少20個甚至更多的編碼基因或非編碼RNA進行基因干擾、敲除或者過表達等基因操作;還可以一次性對大量的突變位點/SNP位點進行過表達,然后在細胞層面進行功能表型檢測,篩選有明顯功能的基因或者突變位點??梢源蠓瓤s短尋找新功能基因的科研時間,提高科研效率和節約科研成本。

    技術條件

    1. 全球領先的基因操作慢病毒文庫資源
    shRNA-SETTM慢病毒shRNA文庫
    90000個RNA干擾慢病毒克隆,覆蓋超過22000個人類基因


    cDNA--SETTM全長基因克隆文庫

    覆蓋超過20000個人類基因的ORF克隆



    各種細胞模型(300多株)

    種類齊全的病毒工具(慢病毒、腺病毒、AAV)




    2. 超過10年的應用經驗,實驗人員技術熟練、經驗豐富




    3. 多種高內涵篩選儀器平臺

    ThermoFisher Cellomics、Brooks Automation Celigo、YOKOGAWA CQ1




    4. 高檢出率




    5. 重復性好


    HCS的多種應用案例

    增殖功能基因篩選



    調控不同基因的慢病毒感染目的細胞后,通過高內涵儀器連續多天快速掃板,拍攝調控不同基因以后細胞的增殖情況,通過增殖曲線可以準備的判斷哪些基因knock-down或overexpression以后能夠導致細胞增殖能力的變化,篩選增殖相關的功能基因。




    轉移相關功能基因篩選(劃痕法)


    調控不同基因的慢病毒感染目的細胞后,劃痕處理,通過高內涵儀器快速掃板,拍攝多個時間點劃痕愈合情況,觀察哪些基因上調或者下調以后能夠影響細胞的遷移功能,篩選轉移相關的功能基因




    轉移相關功能基因篩選(transwell法)


    調控不同基因的慢病毒感染目的細胞后,根據感染后的細胞在一定時間內穿過transwell小室的細胞量,對細胞一定時間內的遷移率進行統計,通過shCtrl與各實驗組遷移率比較后進行統計,篩選轉移相關功能基因




    明星基因功能回復panel

    尋找目的基因或者是處理因素(如:藥物)相關的功能回復基因(目的基因或者是處理因素必須是抑制細胞增殖或者轉移的)。



    在目的細胞中用shRNA包裝成慢病毒干擾目的基因,然后在目的基因干擾的情況下,感染下游明星通路基因的調控慢病毒,檢測細胞的增殖或者轉移情況,尋找跟目的基因有功能回復關系的明星通路基因。




    藥靶基因篩選


    調控不同基因的慢病毒感染目的細胞后,通過高內涵儀器連續多天快速掃板,拍攝調控不同基因以后細胞對藥物的敏感情況,通過計算不同基因操作以后,藥物對細胞的抑制率,初步篩選和藥物相關的目標基因。




    血管新生功能基因篩選



    調控不同基因的慢病毒感染腫瘤細胞一定時間后,將細胞上清轉移至人臍靜脈內皮細胞系培養孔中,通過HCS快速掃板,拍攝人臍靜脈內皮細胞的成管情況,可以快速的檢測上調,下調或者敲除不同基因的情況下,血管新生能力的變化,從而篩選到血管新生功能相關的功能基因。

    服務內容

    服務內容 基因操作 基因類型 物種 功能方向 備注
    RNA干擾HCS shRNA 編碼基因
    ncRNA/circRNA
    Human/rat/
    mouse
    增殖和轉移
    (劃痕、transwell )
    基因大小建議
    4kb以下
    常規過表達HCS CDS區過表達 編碼基因
    LncRNA/miRNA
    Human/rat/
    mouse
    增殖和轉移(劃痕) CSD區建議
    4kb以下,
    推薦2.5kb以下
    明星基因功能回復panel shRNA干擾和
    CDS區過表達
    過表達: AKT1、mTOR、ERK1、P38、MYC、β -Catenin、NFkB-p65、
    N-Cadherin、MMP2、MMP9、FN1、VIM、Snail、 Slug、 TWIST、JNK1
    干擾: p21、 p27、p16、E-Cadherin、 TP53
    功能方向:增殖和轉移

    參考文獻

    1.Microscopy-Based High-Content Screening . Cell163, December 3, 2015.

    2.A Lentiviral RNAi Library for Human and Mouse Genes Applied to an Arrayed Viral High-Content Screen . Cell124, 1283–1298, March 24, 2006.

    3.Integration of high-content screening and untargeted metabolomics for comprehensive functional annotation of natural product libraries ;PNAS,September 29, 2015; VOL112; No. 39,11999–12004.

    4.Genome-Scale CRISPR-Cas9 Knockout Screening in Human Cells.Science,3 January 2014; VOL 343.

    5.Genome-scale transcriptional activation by an engineered CRISPR-Cas9 complex. Nature 29 January 2015; VOL 517.

    6.Systematic Functional Annotation of Somatic Mutations in Cancer .Cancer Cell33, 450–462, March 12, 2018.Functional annotation of rare gene aberration drivers of pancreatic cancer. Nature communications; 7:10500; DOI: 10.1038; ncomms10500.

    7.An RNAi screen of Rho signalling networks identifies RhoH as a regulator of Rac1 in prostate cancer cell migration. BMC Biology (2018) 16:29.

    8.Functional screening identifies miRNAs inducing cardiac regeneration. Nature; VOL 492; 20/27 december 2012.

    9.High-content screening identifies kinase inhibitors that overcome venetoclax resistance in activated CLL cells. Blood, 18 August 2016; Volume 128, Number 7.

    91麻豆精品福利在线观看,91麻豆精品国产,91麻豆精品国产片在线观看,91麻豆精品国产自产,91麻豆精品国产自产在线