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    靶標驗證

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    流式細胞周期檢測

    通過流式細胞術檢測PI熒光強度直接反映細胞各時相的DNA分布狀態,從而計算出各時相的百分率。

    技術原理:

    細胞周期(cell cycle):是指細胞從前一次分裂結束起到下一次分裂結束為止的活動過程,通常由G0/G1期、S期、G2/M期組成。G0/G1期:二倍體細胞的DNA含量(2N)。S期:DNA開始合成,這時細胞核內DNA的含量介于G1期和G2期之間。G2/M期:DNA復制結束成為4倍體(4N)。

    碘化丙啶(Propidium, PI)為插入性核酸熒光染料,能選擇性的嵌入核酸DNA或RNA雙鏈螺旋的堿基之間,產生紅色熒光,并且熒光強度和所嵌入的核酸含量成正比。細胞周期檢測時,首先用RNA 酶將RNA消化排除影響,通過流式細胞術檢測PI熒光強度直接反映細胞各時相的DNA分布狀態,從而計算出各時相的百分率。

    結果展示:


    用待研基因shRNA慢病毒感染U-2OS細胞,5天后收集細胞,PI染色,經流式細胞儀(Millipore,Guava easyCyte HT)檢測,結果顯示,shRNA下調目的基因表達后,G1期細胞減少(P<0.05), G2期細胞增多(P<0.05),表明待研基因與U-2OS細胞周期顯著相關。

    參考文獻:

    Krishan, A. (1975) Rapid flow cytofluormetric analysis of mammalian cells by propidium iodide staining. J. Cell. Biol. 66: pp. 188-193

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