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    靶標驗證

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    劃痕愈合實驗

    在體外培養的單層細胞上,劃痕致傷,然后以低濃度血清(0.5%)培養基培養,檢測細胞一定時間后劃痕愈合情況,從而反映細胞轉移能力

    技術原理

    上皮細胞,癌細胞,角質細胞,在生理狀態下,形成單層或者復層上皮,當病理狀態下,比如創傷愈合,細胞遷移的時候,以側向運動為主,劃痕實驗很好的模擬了這種運動形式。細胞劃痕是測定腫瘤細胞的運動特性的方法之一,借鑒體外細胞致傷愈合實驗模型,在體外培養的單層細胞上,劃痕致傷,然后通過藥物或者干擾手段觀察腫瘤細胞的遷移能力。

    吉凱基因提供的劃痕實驗,還可在HCS儀器中進行(比如Cellomics儀器),通過一次劃痕實驗,檢測幾組、甚至幾十組經不同條件處理的細胞劃痕愈傷能力是否有差異,從而篩選出陽性實驗組。

    結果展示


    針對目的基因的shRNA靶點病毒及對照病毒感染NOZ細胞,三天后收集細胞并接種至96孔板中,次日待細胞貼壁后用劃痕器均勻劃傷,用PBS洗盡劃痕時殘余細胞,以低濃度血清(0.5%)培養基培養,檢測細胞24小時后劃痕愈合情況,結果顯示, 劃痕24h后,shCtrl組NOZ細胞平均遷移面積(像素面積)明顯大于shGene組細胞,表明目的基因與NOZ細胞轉移相關。

    參考文獻

    1.Lee SJ. et al. Role of the p38 MAPK signaling pathway in mediating interleukin-28A-induced migration of UMUC-3 cells. Int J Mol Med. 2012 Oct;30(4):945-52.

    2.Chen LM. et al. Thrombomodulin mediates the progression of epithelial ovarian cancer cells. Tumour Biol. 2013 Dec;34(6):3743-51.5/ 5.

    3.Arsic, N. et al. A Novel Function for Cyclin A2: Control of Cell Invasion Via Rhoa Signaling. J. Cell Biol. 196, 147-162 (2012).

    4.Espada J1, Matabuena M. et al. Cryptomphalus aspersa mollusc eggs extract promotes migration and prevents cutaneous ageing in keratinocytes and dermal fibroblasts in vitro. Int J Cosmet Sci. 2015 Feb;37(1):41-55.

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