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    靶標驗證

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    流式細胞凋亡檢測

    吉凱基因可根據客戶選擇或細胞外源表達的熒光類型,相應提供Annexin V單染或Annexin V & PI雙染凋亡檢測,滿足不同的實驗需求。

    技術原理

    正常細胞中,磷酯酰絲氨酸(PS)主要分布在細胞膜內側,即與細胞漿相鄰的一側。在細胞發生凋亡的早期,不同類型細胞的PS都會外翻到細胞表面,暴露在細胞膜外側,這一變化早于細胞皺縮、染色質濃縮、DNA片斷化和細胞膜的通透性增加等凋亡現象。Annexin V是一種Ca+依賴的磷脂結合蛋白,具有易于結合磷脂類的特性,對PS有高度的親和性,因此,Annexin V標記上熒光素可充當一敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS,從而檢測處于早期凋亡的細胞。
    PS 外翻不是早期凋亡細胞獨有,也發生在中、晚期凋亡和壞死細胞中。但早期凋亡細胞的細胞膜是完好的,而中、晚凋和壞死細胞的細胞膜完整性已經喪失。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但凋亡中晚期的細胞和死細胞由于細胞膜通透性的增加,PI 能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V 與PI 匹配使用,就可以將處于不同凋亡時期的細胞區分開來。

    結果展示


    用待研基因shRNA慢病毒感染A549細胞,5天后收集細胞,用APC標記的Annexin Ⅴ染色,經流式細胞儀(Millipore,Guava easyCyte HT)檢測,結果顯示,shRNA下調目的基因表達后,凋亡細胞顯著增多,表明待研基因與A549細胞凋亡顯著相關。

    參考文獻

    Yuliang Pan, Wenqian Shan, Heting Fang, et,al. Sensitive and visible detection of apoptotic cells on Annexin-V modified substrate using aminophenylboronic acid modified gold nanoparticles (APBA-GNPs) labeling. Biosensors and Bioelectronics.2014, 52:62-68.

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