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    靶標驗證

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    Tunel檢測

    TUNEL是一種經典的細胞凋亡檢測方法,凋亡細胞會發生DNA雙鏈斷裂,從而在斷裂處暴露出3’-OH基團,利用熒光/化學基團標記的dUTP與3’OH基團結合后,可通過熒光成像/染色反應指示凋亡細胞。



    技術原理:

    細胞在發生凋亡時,會激活一些DNA內切酶,這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測,可以發現180-200bp的DNA ladder?;蚪MDNA斷裂時,暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上熒光素 (FITC) 標記的dUTP (fluorescein-dUTP) ,從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測,這就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法檢測細胞凋亡的原理。

    結果展示:

    用待研基因shRNA慢病毒感染A549細胞,TUNEL染色,結果顯示,shRNA下調目的基因表達后,凋亡細胞顯著增多,表明待研基因與A549細胞凋亡顯著相關。

    參考文獻:

    1.Wyllie, A. H. etal. (1980) Cell death: the significance of apoptosis. Int Rev Cytol.1980;68:251-306.

    2.gorczyca, w. etal. (1993);Induction of DNA strand breaks associated withapoptosis during treatment of leukemias. leukemia 7, 659-670.

    3.Gold, R. etal. (1994);Differentiation between cellular apoptosis and necrosis bythe combined use of in situ tailing and nick translation techniques.Lab. Invest. 71,219.

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